目的 探究BHLHE40能否通过靶向高迁移率族蛋白A2（HMGA2）激活氧化磷酸化（OXPHOS）通路进而影响甲状腺癌细胞对顺铂的敏感性。方法 通过在线数据库TCGA-甲状腺癌和hTFtarget分析HMGA2及上游转录因子BHLHE40在甲状腺癌组织中的mRNA表达情况。采用脂质体转染法将si-HMGA2、oe-HMGA2、oe-BHLHE40以及阴性对照si-NC、oe-NC转染至甲状腺癌细胞K1和SW579中，通过实时荧光定量PCR检测BHLHE40和HMGA2在甲状腺癌细胞SW579、FTC-133、K1和正常甲状腺细胞Nthy ori3-1中的mRNA表达水平，采用MTT法检测细胞活力，CCK-8法计算顺铂半抑制浓度（IC50）值，流式细胞术检测细胞凋亡水平，蛋白质印迹法检测OXPHOS复合体的表达，Seahorse XFe 96分析细胞的耗氧率。双荧光素酶报告实验和染色质免疫沉淀实验分析BHLHE40与HMGA2的结合关系。结果 TCGA 数据库结果表明，HMGA2和BHLHE40 mRNA在甲状腺癌组织中的表达（10.57±2.58、13.89±1.13）均较甲状腺正常组织高（4.82±1.69、12.28±1.01），差异均具有统计学意义（t=16.69，P<0.001；t=10.43，P<0.001）。实时荧光定量PCR结果发现，正常甲状腺细胞Nthy ori3-1、甲状腺癌细胞SW579、FTC-133和K1中HMGA2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.13、2.94±0.23、4.71±0.41和6.29±0.49，BHLHE40 mRNA相对表达量分别为1.00±0.12、2.60±0.23、3.39±0.35和6.18±0.51，差异均具有统计学意义（F=130.50，P<0.001；F=125.20，P<0.001）。进一步两两比较发现，与正常甲状腺细胞相比，甲状腺癌细胞中HMGA2和BHLHE40 mRNA的表达水平均显著升高（均P<0.001）。MTT法检测显示，与si-NC组相比，si-HMGA2处理显著降低了K1细胞的细胞活力（均P<0.05），oe-HMGA2处理相对于oe-NC组显著增加了SW579细胞的细胞活力（均P<0.05）；与oe-NC+DMSO组相比，oe-HMGA2+DMSO组SW579细胞的细胞活力增强，而OXPHOS通路抑制剂Gboxin能够逆转过表达HMGA2对细胞活力的影响（均P<0.05）。流式细胞术和CCK-8实验结果显示，与si-NC组（凋亡水平：6.19%±0.28%；顺铂IC50值：17.47 μmol/L）相比，敲低HMGA2能增加K1细胞的凋亡水平（11.96%±0.32%；t=19.17，P<0.001）和顺铂敏感性（IC50值：1.49 μmol/L）；与oe-NC组（凋亡水平：9.98%±0.32%；顺铂IC50值：8.17 μmol/L）相比，过表达HMGA2显著降低了SW579细胞凋亡水平（4.32%±0.25%；t=19.65，P<0.001）和顺铂敏感性（IC50值：34.95 μmol/L）。双荧光素酶报告实验结果发现，与si-NC组相比，在人肾上皮细胞293T细胞中敲低BHLHE40的表达显著降低野生型HMGA2的荧光素酶活性（0.31±0.02比1.00±0.11；t=10.69，P=0.004），但对于突变型HMGA2的荧光素酶活性没有显著性影响（1.06±0.11比1.00±0.07；t=0.80，P=0.470）。染色质免疫沉淀实验结果显示，与IgG组（1.00±0.10）相比，anti-BHLHE40组K1细胞的HMGA2 mRNA表达水平显著增加（6.57±0.62；t=15.36，P<0.001）。与oe-NC+DMSO组相比，oe-HMGA2+DMSO组SW579细胞凋亡水平（P<0.05）和顺铂敏感性均降低，OXPHOS复合体Ⅰ~Ⅴ表达显著增强，细胞耗氧率升高（均P<0.05），oe-HMGA2+Gboxin处理可逆转过表达HMGA2的影响（均P<0.05）。回复实验表明，与oe-NC+si-NC组相比，过表达BHLHE40后SW579细胞的细胞活力和OXPHOS复合体Ⅰ~Ⅴ的表达增强，细胞耗氧率和顺铂IC50值显著增加，细胞凋亡水平下降（均P<0.05）；而同时敲低HMGA2可逆转过表达BHLHE40的影响（均P<0.05）。结论 BHLHE40可通过靶向调控HMGA2的表达激活氧化磷酸化通路，进而影响甲状腺癌细胞对顺铂的敏感性。
