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    2018年, 第45卷, 第10期 刊出日期:2018-10-08 上一期    下一期
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    论著
    PFKFB3促进腺样囊性癌ACC-2细胞增殖、迁移、侵袭和转移
    乔燕,柳鑫
    2018, 45 (10):  577-582.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.001
    摘要 ( 374 )   PDF(2415KB) ( 614 )  
    目的  研究腺样囊性癌中糖酵解限速酶6-磷酸果糖2激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(PFKFB3)的表达水平,及其对腺样囊性癌细胞增殖、迁移、体内成瘤的影响。方法  应用免疫组织化学技术和Western blotting检测29例腺样囊性癌和10例癌旁正常唾液腺组织中PFKFB3的表达水平。腺病毒载体沉默腺样囊性癌ACC2细胞中PFKFB3,通过细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell小室实验、裸鼠移植瘤模型和裸鼠肺转移模型观察PFKFB3沉默对细胞生长、迁移、侵袭、体内成瘤和远处转移的影响。结果免疫组织化学染色结果显示,PFKFB3在腺样囊性癌组织中阳性率为93.1%(27/29),在正常唾液腺中阳性率为20.0%(2/10),差异有统计学意义(χ2=20.84,P<0.001)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)增殖实验结果显示,72 h时,PFKFB3沉默后的腺样囊性癌ACC2(PFKFB3-ACC-2)细胞组吸光度为1.8±0.2,明显低于ACC2细胞组吸光度4.7±0.8,差异具有统计学意义(t=3.582,P=0.001)。细胞划痕实验结果表明,刮除细胞24 h后,PFKFB3-ACC-2细胞组划痕区细胞数量为(99.8±13.2)个,低于ACC2组[(263.0±97.4)个],差异具有统计学意义(t=2.868,P=0.029)。Transwell小室检测结果发现,24 h时穿过基质胶的PFKFB3-ACC-2细胞数量[(17.6±2.1)个]明显少于ACC2细胞[(28.6±3.8)个],差异有统计学意义(t=4.452,P=0.004)。PFKFB3-ACC2细胞组肿瘤体积为(623.5±134.1)mm3,明显小于ACC2细胞组肿瘤体积[(1 621.0±278.1)mm3],差异有统计学意义(t=4.213,P=0.001)。ACC-2细胞组裸鼠肺部转移灶数目为(18.1±3.2)个,明显多于PFKFB3-ACC2细胞组[(4.1±2.2)个,t=6.322,P=0.001]。结论  腺样囊性癌组织中PFKFB3表达水平明显高于正常唾液腺组织,且高表达的PFKFB3在腺样囊性癌细胞增殖、迁移、侵袭和转移等生物学行为中起促进作用。
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    洛铂对宫颈癌CaSki细胞增殖侵袭的影响
    李翡,贺丰杰,朱虹丽,李楠,肖新春,李小宁,陈梅,郑伟,杨丽丽
    2018, 45 (10):  583-587.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.002
    摘要 ( 468 )   PDF(1432KB) ( 664 )  
    目的  探讨洛铂对宫颈癌CaSki细胞增殖侵袭的影响。方法  选取人宫颈癌CaSki细胞株,采用随机数字表法将其随机分为空白对照组、2、6、12 μg/ml洛铂组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,采用Western blotting检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白表达。结果  空白对照组、2、6、12 μg/ml洛铂组培养24 h的吸光度(A)值分别为0.513±0.023、0.428±0.014、0.380±0.012、0.300±0.013;培养48 h的A值分别为0.831±0.024、0.558±0.019、0.415±0.015、0.088±0.009;培养72 h的A值分别为1.153±0.022、0.572±0.023、0.201±0.017、0.052±0.014,差异均具有统计学意义(F=12.922,P<0.001;F=10.192,P<0.001;F=11.192,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。倒置显微镜下可观察到洛铂组细胞皱缩变圆,体积缩小,形态不规则,细胞数量减少,间隙增大,且随洛铂浓度及作用时间的增加,这种变化越明显。空白对照组、2、6、12 μg/ml洛铂组穿膜细胞数分别为87.27±9.38、71.02±8.92、53.20±10.02、21.02±7.37,差异有统计学意义(F=87.291,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。空白对照组、2、6、12 μg/ml洛铂组CaSki细胞ERK蛋白A值(0.955±0.021、0.953±0.023、0.950±0.020、0.951±0.022)比较差异无统计学意义(F=2.033,P=0.783);空白对照组、2、6、12 μg/ml洛铂组CaSki细胞p-ERK蛋白A值分别为0.941±0.015、0.831±0.020、0.620±0.019、0.493±0.017,组间比较差异有统计学意义(F=11.921,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论  洛铂能显著抑制宫颈癌CaSki细胞增殖侵袭,可能与其抑制pERK蛋白表达有关。
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    胃癌患者原发病灶的组织学评价与新辅助化疗预后的相关性
    郭萍,张军鹏,贺继东
    2018, 45 (10):  588-592.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.003
    摘要 ( 343 )   PDF(992KB) ( 500 )  
    目的 探讨胃癌原发病灶的组织学评价与新辅助化疗预后的相关性。方法 本研究共纳入2006年1月至2012年12月期间在我院进行新辅助化疗的117例Ⅱ~Ⅲ期胃癌患者。所有患者接受2个疗程的新辅助化疗后进行CT、消化道造影或内镜检查进行肿瘤化疗应答性评估,并根据手术标本的免疫组织化学结果进行化疗反应性评估。以Kappa系数(κ)分析不同评估方式对化疗反应性评估的一致性。通过5年生存率判断不同评价方式下的化疗反应性与生存率的相关性。结果 分别有38例(32.5%)、78例(66.7%)、43例(36.8%)患者被认为是CT、消化道造影或内镜评价、组织学评价下的化疗应答患者。原发病灶的组织学评价与CT、消化道造影或内镜评价的相关性较差(κ系数分别为0.10和0.19)。CT评估化疗应答患者的中位生存期>60个月、化疗无应答患者的中位生存期为43个月,差异无统计学意义(χ2=2.978,P=0.076);消化道造影或内镜检查评估化疗应答患者的中位生存期>60个月、化疗无应答患者的中位生存期为29个月,差异无统计学意义(χ2=1.230,P=0.239)。组织学评估化疗应答患者的中位生存期>60个月,而化疗无应答患者的中位生存期仅为18.5个月,差异有统计学意义(χ2=29.020,P<0.001)。多因素Cox回归分析证实组织学评价下的化疗无应答(HR=4.021,95%CI为1.548~8.767,P=0.002)、消化道造影或内镜检查评价为化疗无应答(HR=8.210,95%CI为4.333~17.980,P<0.001)是胃癌患者不良预后的独立危险因素,而肠型胃癌(HR=0.241,95%CI为0.080~0.871,P=0.019)是胃癌患者生存率改善的独立预测因素。结论 基于原发病灶组织学评估胃癌患者新辅助化疗应答程度能够有效预测患者的远期生存。
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    术中腹腔灌注雷替曲塞治疗直肠癌患者的短期安全性评估
    刘贺,张宏,丛进春,崔明明,刘鼎盛,陈春生
    2018, 45 (10):  593-598.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.004
    摘要 ( 606 )   PDF(664KB) ( 658 )  
    目的 观察直肠癌患者行腹腔镜下Dixon手术术中腹腔灌注雷替曲塞的短期安全性。方法 回顾性分析2016年6月至2017年12月中国医科大学附属盛京医院结直肠肿瘤外科收治的175例直肠癌患者,按照术中是否行腹腔灌注雷替曲塞将患者分为腹腔灌注雷替曲塞组(n=89)和腹腔灌注生理盐水组(n=86)。记录每组患者术前及术后3 d血液学相关指标,计算患者的术后排气时间、引流管术后24 h引流量,评价患者术后并发症,包括吻合口瘘、腹膜刺激征、切口感染及肺部感染。结果 所有患者均顺利完成手术。两组患者的性别(χ2=0.000,P=0.990)、肿瘤浸润深度(χ2=0.003,P=0.956)、淋巴结转移程度(Z=-0.590,P=0.556)、TNM分期(Z=0.081,P=0.936)、病理类型(Z=1.092,P=0.896)比较,差异均无统计学意义。腹腔灌注雷替曲塞组和腹腔灌注生理盐水组患者术后排气时间[(75.49±3.97)h∶(74.28±3.46)h,t=0.479,P=0.523]、引流管术后24 h引流量[(201.1±54.1)ml∶(242.8±25.7)ml,t=0.338,P=0.656]、吻合口瘘(1.1%∶2.3%,χ2=0.351,P=0.554)、腹膜刺激征(1.1%∶2.3%,χ2=0.351,P=0.554)、切口感染(2.2%∶3.5%,χ2=0.243,P=0.622)及肺部感染(2.2%∶2.3%,χ2=0.001,P=0.972)相比,差异均无统计学意义。腹腔灌注雷替曲塞组和腹腔灌注生理盐水组患者术后3 d红细胞计数[(3.56±0.27)×1012/L∶(3.63±0.26)×1012/L,t=0.716,P=0.152]、白细胞计数[(7.63±0.20)×109/L∶(8.24±0.26)×109/L,t=0.176,P=0.872),血小板计数[(170.13±20.12)×109/L∶(180.18±21.03)×109/L,t=0.103,P=0.975]、谷丙转氨酶[(13.25±2.31)U/L∶(13.28±1.46) U/L,t=0.321,P=0.713]、谷草转氨酶[(16.51±1.28)U/L∶(16.23±2.03) U/L,t=0.131,P=0.894]及肌酐[(77.36±6.49)μmol/L∶(78.39±6.64)μmol/L,t=0.499,P=0.519]差异均无统计学意义。结论 术中采用腹腔灌注雷替曲塞具有较高的安全性,对患者术后恢复无明显影响,且操作简单,有良好的可行性,值得在临床上推广使用。
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    肝细胞癌患者射频消融术后非特异性免疫治疗的临床分析
    尹秋实,李望
    2018, 45 (10):  599-603.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.005
    摘要 ( 508 )   PDF(660KB) ( 455 )  
    目的 探讨肝细胞癌患者射频消融术后非特异性免疫治疗效果。方法 回顾性分析2012年12月至2014年12月我院接诊的120例肝细胞癌患者临床资料。按照术后治疗方式不同分为观察组(n=60)和对照组(n=60)。两组均择期行射频消融术,对照组术后进行常规治疗,观察组进行非特异性免疫治疗(重组人白细胞介素2注射液+胸腺法新+斑蝥酸钠维生素B6注射液)。治疗3周后,比较两组治疗前后细胞免疫功能、体液免疫功能及生命质量的变化,并比较临床疗效及3年内生存率。结果 治疗后,细胞免疫功能中,观察组CD3+[(62.31±9.65)%∶(57.08±8.03)%]、CD8+[(26.85±3.22)%∶(33.41±3.86)%]、CD4+/CD8+(1.95±0.34∶1.53±0.27)、自然杀伤细胞[(25.76±4.53)%∶(21.14±4.20)%]均优于对照组,差异有统计学意义(t=3.227,P<0.001;t=10.109,P<0.001;t=7.493,P<0.001;t=5.793,P<0.001);体液免疫功能中,观察组免疫球蛋白IgG[(19.45±2.45)g/L∶(15.93±2.07)g/L]、IgM[(2.15±0.42)g/L∶(1.83±0.31)g/L]、IgA[(3.08±0.79)g/L∶(2.73±0.56)g/L]均明显优于对照组,差异有统计学意义(t=8.501,P<0.001;t=4.748,P<0.001;t=2.800,P<0.001);生命质量量表评分中,观察组社会功能评分(59.73±4.62∶53.91±3.84)、躯体功能评分(55.83±5.62∶47.85±5.17)、角色功能评分(51.64±5.83∶46.82±5.46)、认知功能评分(64.82±5.19∶58.04±4.92)、情感功能评分(68.94±5.62∶60.38±5.10)均明显比对照组高,差异有统计学意义(t=7.504,P<0.001;t=8.095,P<0.001;t=4.674,P<0.001;t=7.344,P<0.001;t=8.737,P<0.001);观察组临床疗效总缓解率(81.67%∶65.00%)高于对照组,差异有统计学意义(χ2=4.261,P=0.039);观察组1年生存率(91.67%∶78.33%)、2年生存率(85.00%∶68.33%)、3年生存率(75.00%∶53.33%)均高于对照组,差异有统计学意义(χ2=4.781,P=0.029)。结论 肝细胞癌患者射频消融术后应用非特异性免疫治疗可有效改善免疫功能,有助于提高临床疗效及生命质量。
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    SCCAg、TAP、CEA对宫颈癌新辅助化疗疗效的评估价值
    汪萍萍,冯六连
    2018, 45 (10):  604-609.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.006
    摘要 ( 806 )   PDF(819KB) ( 674 )  
    目的 探讨鳞状细胞癌抗原(SCCAg)、肿瘤异常蛋白(TAP)、癌胚抗原(CEA)对宫颈癌新辅助化疗疗效的评估价值。方法 选取2015年9月至2017年9月本院新辅助化疗治疗的宫颈癌患者100例,同期选取健康人员100例作为对照组,检测所有人员血清SCCAg、TAP、CEA水平,分析SCCAg、TAP、CEA水平与化疗疗效的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析不同指标评估宫颈癌新辅助化疗疗效的效能。结果 宫颈癌患者SCCAg[(4.95±0.65)μg/L∶(0.22±0.04)μg/L]、TAP[(175.21±25.42)μm2∶(75.45±9.98)μm2]、CEA[(35.65±4.23)ng/ml∶(1.26±0.34)ng/ml]水平明显高于对照组,差异有统计学意义(t=75.382,P<0.001;t=62.215,P<0.001;t=55.452,P<0.001)。100例宫颈癌患者化疗3个月后,完全缓解(CR)6例(6.00%)、部分缓解(PR)50例(50.00%)、病情稳定(SD)26例(26.00%)、疾病进展(PD)18例(18.00%)。在SCCAg、TAP、CEA水平方面,CR患者[(2.12±0.32)μg/L∶(4.90±0.52)μg/L、(133.12±14.22)μm2∶(175.12±24.32)μm2、(10.34±2.42)ng/ml∶(38.21±7.82)ng/ml]和PR患者化疗后较化疗前[(3.22±0.47)μg/L∶(4.94±0.53)μg/L、(145.22±17.77)μm2∶(179.52±25.53)μm2、(16.75±3.02)ng/ml∶(39.12±7.92)ng/ml]显著降低,差异有统计学意义(t=11.153,P<0.001;t=3.562,P=0.004;t=8.340,P<0.001;t=17.169,P<0.001;t=7.797,P<0.001;t=18.662,P<0.001);PD患者化疗后较化疗前[(7.21±0.84)μg/L∶(5.06±0.57)μg/L、(213.21±29.64)μm2∶(171.56±26.87)μm2、(46.64±5.12)ng/ml∶(35.75±7.88)ng/ml]均明显上升,差异有统计学意义(t=8.986,P<0.001;t=4.417,P<0.001;t=4.917,P<0.001);SD患者化疗前后比较[(5.03±0.57)μg/L∶(4.97±0.55)μg/L、(175.51±23.37)μm2∶(176.27±26.55)μm2、(35.26±7.34)ng/ml∶(37.04±7.73)ng/ml],差异无统计学意义(t=0.386,P=0.701;t=0.110,P=0.913;t=0.851,P=0.399)。ROC曲线分析结果显示,SCCAg评估宫颈癌新辅助化疗疗效的敏感性、特异性、准确率分别为85.71%、81.82%、84.00%,TAP分别为82.14%、77.27%、80.00%,CEA分别为78.57%、77.27%、78.00%,三者联合时分别为96.43%、95.45%、96.00%,三者联合检测时敏感性、特异性、准确率明显高于三者单独检测,差异有统计学意义(χ2=14.434,P<0.001;χ2=15.421,P<0.001;χ2=21.741,P<0.001)。结论 宫颈癌患者新辅助化疗后血清SCCAg、TAP、CEA水平降低,检测其水平变化可作为评估其化疗疗效的重要指标,且三者联合检测时具有更佳的评估效能,值得临床作进一步推广。
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    二线方案联合利妥昔单抗治疗复发或难治性非霍奇金淋巴瘤的疗效观察
    高飞,杜明珠,李光,边思倩,王浩,刘锋,宋艳萍
    2018, 45 (10):  610-614.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.007
    摘要 ( 604 )   PDF(661KB) ( 591 )  
    目的 探讨含吉西他滨的二线化疗方案联合利妥昔单抗治疗复发或难治性B细胞性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的临床疗效、安全性和预后因素。方法 选取西安市中心医院2008年7月至2015年 2月收治的157例复发或难治性B细胞性NHL患者,其中87例患者采用GEMOX方案(吉西他滨+奥沙利铂)联合利妥昔单抗化疗,70例患者采用GDP方案(吉西他滨+顺铂+地塞米松)联合利妥昔单抗化疗,评价两组化疗疗效。依据既往是否应用过利妥昔单抗对患者进行分组(n=52,n=105),对比分析两组总有效率(ORR)。分析影响患者总生存(OS)的相关预后因素,并观察治疗后患者的不良反应。结果 GEMOX方案联合利妥昔单抗组和GDP方案联合利妥昔单抗组的ORR分别为65.5%和55.7%,差异无统计学意义(χ2=1.58,P=0.210)。52例既往应用过利妥昔单抗的患者ORR为32.7%,105例既往未应用过利妥昔单抗的患者ORR为75.2%,差异有统计学意义(χ2=29.50,P<0.001)。单因素分析结果显示,淋巴瘤国际预后指数(IPI)评分中高危或高危(χ2=69.21,P<0.001)、乳酸脱氢酶升高(χ2=16.90,P<0.001)、难治性患者(χ2=14.43,P=0.001)、大包块(χ2=4.57,P=0.030)、挽救性化疗疗效(χ2=50.85,P<0.001)为影响患者OS的危险因素。Cox多因素分析显示,IPI评分中高危或高危(HR=2.138,95%CI为1.301~3.512,P=0.001)、难治性患者(HR=3.157,95% CI为1.001~10.644,P=0.014)、挽救性化疗后未达CR或PR(HR=3.017,95%CI为2.218~7.366,P<0.001)、乳酸脱氢酶升高(HR=2.236,95%CI为1.797~2.781,P=0.001)、大包块患者(HR=1.792;95%CI为1.255~2.558,P<0.001)为影响患者OS的独立危险因素。化疗不良反应为中性粒细胞减少、血小板减少、恶心呕吐、肝损害以及心脏毒性,无治疗相关性死亡。结论 含吉西他滨的二线化疗方案联合利妥昔单抗治疗复发或难治性B细胞性NHL疗效较好,安全性好。IPI评分中高危或高危、难治性患者、挽救性化疗后未达CR或PR、乳酸脱氢酶升高、大包块为影响患者OS的独立危险因素。既往应用过利妥昔单抗的复发或难治性患者,再次应用效果欠佳。
    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    综述
    斯钙素2在肿瘤中的研究进展
    余计赏,吴帆
    2018, 45 (10):  615-618.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.008
    摘要 ( 525 )   PDF(650KB) ( 589 )  
    斯钙素2是一种分泌型糖蛋白激素,在多种人类恶性肿瘤中表达升高。斯钙素2通过多条信号传导通路参与肿瘤增殖、凋亡、侵袭转移、缺氧耐受和化疗耐药等诸多生物学事件的调控,提示其可能是肿瘤分子调控网络中的一处重要节点。深入阐述斯钙素2在肿瘤中的作用机制,有望为肿瘤的临床诊疗提供一个新的分子标志物和治疗靶点。
    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    铁死亡作用机制及其与肿瘤的关系
    程霖,赵明峰
    2018, 45 (10):  619-623.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.009
    摘要 ( 3577 )   PDF(655KB) ( 2812 )  
    铁死亡是近年来发现的一种新型细胞死亡方式,是铁依赖的脂质过氧化积累介导的细胞死亡,其在形态及生物化学上不同于凋亡、坏死等细胞死亡方式。铁死亡发生过程中伴随着谷胱甘肽的耗竭、谷胱甘肽过氧化物酶活性的下降以及大量脂质过氧化物的产生。研究发现,铁死亡可参与肿瘤的发生、进展,激活铁死亡通路中不同的调节位点可促进肿瘤细胞的死亡。因此,明确铁死亡通路及其调节肿瘤发展的相关机制可能为临床治疗肿瘤提供新的思路。
    参考文献 | 相关文章 | 计量指标
    坏死性凋亡相关复合物与肿瘤
    丁金晔,程忠平
    2018, 45 (10):  624-626.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.010
    摘要 ( 482 )   PDF(643KB) ( 582 )  
    坏死性凋亡相关复合物是坏死性凋亡信号通路中的关键信号分子。它的形成受到坏死小体和坏死性凋亡小体等一系列因素的调控。研究发现,坏死性凋亡相关复合物与多种肿瘤密切相关,如胰腺导管腺癌、胶质瘤等。深入研究其调控机制有望为肿瘤分子治疗提供新思路。
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    表现为磨玻璃结节的早期肺腺癌的影像学、组织病理学及分子生物学特点
    马艺,许顺
    2018, 45 (10):  627-631.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.011
    摘要 ( 731 )   PDF(720KB) ( 1280 )  
    随着多层螺旋CT应用于肺癌筛查工作,肺磨玻璃结节(GGN)得到了广泛关注。除了良性疾病,GGN常为早期肺腺癌及其癌前病变的特殊表现。因此,探索GGN的影像学特点与肺腺癌病理亚型及分子生物学之间的关系,对指导临床诊断与治疗具有重要意义。
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    低位直肠癌新辅助放化疗后治疗新策略
    柳麒,孙伟子,魏艳,彭晋,周福祥
    2018, 45 (10):  632-634.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.012
    摘要 ( 521 )   PDF(645KB) ( 464 )  
    直肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其中以低位直肠癌发病率最高。随着对直肠癌生物学行为的深入研究和诊断治疗技术的发展,肿瘤学家对低位直肠癌提出了新的治疗策略——局部切除、等待观察策略。该策略在不失传统标准治疗模式较好的肿瘤控制的情况下,能够更好地保全肛门功能,患者有更好的生命质量。
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    Notch信号通路在黑色素瘤生长、转移中的作用及机制
    夏得淳,康晓静
    2018, 45 (10):  635-638.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.013
    摘要 ( 579 )   PDF(652KB) ( 612 )  
    恶性黑色素瘤是皮肤恶性肿瘤之一,具有高度侵袭性和较强的转移能力,其发病与多种信号通路的异常传导有关,但具体机制尚不完全清楚。Notch信号通路的异常激活与黑色素瘤发病关系密切,其可通过维持肿瘤细胞存活、促进肿瘤血管生成、增强肿瘤细胞的黏附力和侵袭力等方式促进黑色素瘤细胞的生长和转移。进一步了解Notch信号通路的作用机制可能为黑色素瘤的治疗提供新的靶点。
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    病例报道
    肺癌合并活动性肺结核一例
    梁红格,赵静,钟巍,徐燕,陈闽江,王孟昭
    2018, 45 (10):  639-640.  DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2018.10.014
    摘要 ( 395 )   PDF(1922KB) ( 687 )  
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